Логин: Пароль: Регистрация |




РЕКЛАМА
Медицинская Республика
НАЙТИ НА САЙТЕ
НОВОСТЬ ДНЯ
Доктор Чистотелоff в Бетховен

Доктор Чистотелоff в Бетховен

Обрабатывайте лапы животных после прогулки Зоогигиеническим средством Доктор Чистотелоff. Защити своего питомца и своих близких от инфекции.
ПОПУЛЯРНЫЕ НОВОСТИ
РЕКЛАМА

Лабораторная диагностика ротавирусной инфекции

Опубликовано : 13-05-2013, 07:35 | Опубликовал: Nalk | Категория: ---

Ротавирусные гастроэнтериты

В высокоразвитых странах более 60% острых гастроэнтеритов вызывают вирусы из семейства Reoviridae. Среди них доминируют ротавирусы. Род Rotavirus включает ротавирусы человека и вирусы, вызывающие диареи у животных. Последние для человека непатогенные. Ротавирусы человека вызывают, в основном, гастроэнтериты у детей до трех лет и пожилых людей. Возбудитель передается фекально-оральным способом при бытовых контактах. Высокая устойчивость вирусов во внешней среде способствует развитию вспышек гастроэнтеритов особенно в зимний период (до 90%). За белковыми антигенами ротавирусы разделяют на 4 серовариантив.

Материал для лабораторной диагностики

Материалом для лабораторной диагностики служат стул и кровь. Пробы кала принимают в первые часы и дни болезни в стерильные пенициллиновые флаконы и направляют в вирусологической лаборатории в контейнерах со льдом. Готовят 10-20% суспензию в растворе Хэнкса, центрифугируют 30 мин при 3000 об / мин. Центрифугат переносят в стерильный флакон, добавляют фреон 113 или 1000 ЕД / мл пенициллина и 500 ЕД / мл стрептомицина, помещают в холодильник на 10-12 часов. Кровь для серологических реакций принимают в первые 2-3 дня болезни и через 12-14 дней. Лабораторная диагностика вирусных диарей основывается на быстром обнаружении вирусов в кале с помощью электронной и иммунной электронной микроскопии, реакции непрямой гемагглютинации с антительным эритроцитарным вирусных диагностикумом. Используют также иммуноферментный анализ в твердофазном варианте реакцию коаглютинации, метод клонированных РНК-зондов и полимеразной цепной реакции. В первые дни болезни содержание ротавирусов в копроматериалах достигает 106-108 в 1 г, поэтому их обнаружение при прямой электронной микроскопии возможно без дополнительной концентрации. Каплю исследуемого материала наносят на специальные пленки из нитроцеллюлозы и микроскопируют при увеличении 50000. Метод чувствительный и надежный, позволяет быстро обнаружить вирус и исследовать его морфологию. При обнаружении 5-6 вирионов практически в каждом поле зрения можно достоверно подтвердить диагноз ротавирусного гастроэнтерита. Еще большее диагностическое значение имеет метод имуноелектроннои микроскопии. Принцип ее заключается в том, что иммунную противовирусную сыворотку добавляют к освещенной низкоскоростным центрифугированием суспензии фекалий, выдерживают 60 мин при комнатной температуре и еще 12 ч при 4 ° С, затем центрифугируют при 15000 об / мин для осаждения вирусных частиц и иммунных комплексов. Осадок ресуспендируют в 2-3 каплях дистиллированной воды, контрастируют в фосфорно-вольфрамовой кислоты и исследуют под электронным микроскопом. В препаратах обнаруживают характерные скопления ротавирусов. Высокая эффективность метода практически не зависит от исходной концентрации вирусов в исследуемых пробах.

Вирусологические исследования

Вирусологические исследования с целью выделения ротавирусов в культурах клеток или на лабораторных животных в рутинных вирусологических лабораториях не проводится. Наиболее широко в диагностике вирусных гастроэнтеритов используют иммуноферментный анализ. Принцип его заключается в том; что лунки полистироловых планшет сначала сенсибилизують антителами против ротавирусов, а затем добавляют в них освещенную суспензию фекалий, инкубируют 1 ч в термостате. Образован в лунках комплекс антиген-антитело после трехкратного промывания фосфатным буфером проявляют внесением антиглобулиновои сыворотки, конъюгированных с ферментом. После инкубации в термостате добавляют хромогенных субстратов до появления окрашенного продукта реакции. Учет результатов проводят с помощью иммуноферментного анализатора. В небольших лабораториях достаточно часто проводят реакцию обратной непрямой гемагглютинации с использованием антительного ротавирусного эритроцитарного диагностикума. Она проста по методике постановки, хотя и менее чувствительна по сравнению с реакцией ензиммичених антител. В практику лабораторной диагностики вирусных инфекций вводят также тест коаглютинации для индикации ротавирусного антигена в кале больных. На предметное стекло наносят каплю взвеси стафилококков (штамм Cowan 1), сенсибилизированных ротавирусной сывороткой, и добавляют каплю освещенного центрифугированием копроматериалу. При наличии ротавирусов через 30-60 с возникает агглютинация нагруженных антителами стафилококков. Очень чувствительным способом быстрой диагностики вирусных гастроэнтеритов является метод выявления вирусоспецифические РНК с помощью молекулярной гибридизации. Он основан на гибридизации меченых РНК-зондов, фиксированных на нитроцеллюлозные фильтрах. Мечение осуществляют биотином или ферментом, что значительно упрощает и удешевляет метод по сравнению с радиоизотопными метками.

Анализ ротавирусной РНК

Анализ ротавирусной РНК, несмотря на его дороговизну, все шире внедряется в практику, особенно после разработки метода полимеразной цепной реакции. Последняя является чувствительным и специфическим методом диагностики, который, безусловно, является диагностическим тестом нового поколения, так называемым "золотым стандартом". Однако постановка этой реакции все еще требует высокой квалификации исследователя, дорогих реактивов и сложной аппаратуры.

Серологическая диагностика

Серологическая диагностика направлена на выявление специфических антител в парных сыворотках, взятых с двухнедельным интервалом. Для этой цели используют различные нейтрализационных или преципитацийни тесты и непрямую реакцию иммунофлюоресценции. Но в последнее время широко применяют иммуноферментный анализ. Раньше для серодиагностики широко ставили РСК с использованием в качестве антигена предварительно отобранные фекалии больных гастроэнтерит или ротавирусы телят. Но по своей чувствительностью и специфичностью она значительно уступает метода иммуноферментного анализа. Для выявления специфических антител к ротавирусов ставят также реакцию торможения непрямой гемагглютинации с парными сыворотками. Гастроэнтериты у детей могут также вызвать калицивирусы, астровирусы и вирусы Норволк. Все они выделяются с испражнениями в первые 2-3 дня заболевания, не размножаются в культурах клеток или слабо репродуцируются без цитопатического действия. Для лабораторной диагностики гастроенетеритив, вызванных данными вирусами, используют, в основном, метод иммунной электронной микроскопии. Других методов диагностики, доступных для вирусологических лабораторий, пока нет.

(голосов:1)  Просмотров: 5835



Похожие новости
Профилактика ОРВИ - лучше лечения!

Профилактика ОРВИ - лучше лечения!

Эффективная профилактика ОРВИ и гриппа поможет сохранить здоровье даже с сезон простуд, она заключается не только в здоровом образе жизни, но и  в применении современных средств на основе интерферона. Такая профилактика является не чуждой организму, а значит безопасной.   
Ротавирусы. Виды ротавирусов. Строение ротавирусов.

Ротавирусы. Виды ротавирусов. Строение ротавирусов.

Типичным представителем рода является вирус диареи телят Небраски (NCDV). В состав рода входят ротавирусы человека, поросят, ягнят, жеребят, оленей, собак, кошек, кроликов, мышей, обезьян и птиц. Ротавирусы являются этиологическими агентами острых гастроэнтеритов новорожденных животных различных видов и детей раннего возраста. Считают, что возрастная чувствительность связана
Ротавирусные вакцины

Ротавирусные вакцины

Во всем мире ротавирусы являются наиболее распространенной причиной тяжелых диарей у младенцев в возрасте до 1 года и детей младшего возраста. По расчетным данным в 2004 г. приблизительно 527 000 (475 000 – 580 000) случаев смерти, преимущественно в развивающихся странах, были связаны с ротавирусными инфекциями.
Определение гонадотропной функции гипофиза

Определение гонадотропной функции гипофиза

  Передняя доля гипофиза продуцирует гонадотропные гормоны — фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), лютеотропный гормон (ЛТГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ), которые оказывают влияние на функцию яичника. Поэтому исследование функции гипофиза имеет большое значение для выяснения патогенеза нарушений менструального цикла.Гонадотропные гормоны выделяют из мочи п
Люминесцентная микроскопия

Люминесцентная микроскопия

Метод люминесцентной микроскопии основан на том, что при освещении препарата ультрафиолетовыми или синими лучами в объекте исследования вызывается флуоресценция различных оттенков. Для люминесцентной микроскопии необходимы специальные осветители, люминесцентный микроскоп, светофильтры, люминесцирующие красители. Можно использовать обычный биологический микроскоп, снабженный источником интенсивного ультрафиолетового или
Комментарии
Информация

Посетители, находящиеся в группе Гости, не могут оставлять комментарии к данной публикации.
ПРЕДРАКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

ПРЕДРАКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

  При предраковом заболевании возможно перерождение в рак. Перерождению эпителиальной клетки в раковую предшествует ряд гиперпластических и метапластических изменений клеточных элементов. К предраковым состояниям относятся гиперплазия и гипертрофия эпителия, увеличение количества митозов, появление клеточной атипии и гиперкератоза до

10.12.11  ПРЕДРАКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЯИЧНИКОВ

10.12.11  ПРЕДРАКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ТЕЛА МАТКИ

10.12.11  ПРЕДРАКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ НАРУЖНЫХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

10.12.11  ПРЕДРАКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

КАНДИДАМИКОЗ

КАНДИДАМИКОЗ

В связи с широким применением антибиотиков для лечения воспалительных процессов половых органов в последнее время все чаще встречается кандидамикоз внутренних половых органов. Кандидамикоз может быть первичным заболеванием и как осложнение антибиотикотерапии. Кандидамикоз (кандидоз, молочница) вызывается дрожжеподобными грибами р

08.10.11  Кандидамикозный аднексит

08.10.11  Кандидамикозный эндометрит

08.10.11  Кандидамикозный эндоцервицит

08.10.11  Кандидамикозный кольпит

08.10.11  Кандидамикозный вульвит